
cDNA 名词解释
cDNA,全称为互补脱氧核糖核酸(Complementary Deoxyribonucleic Acid),是一种在分子生物学实验中经常遇到的特殊类型的DNA。它并不是直接从生物体的基因组中获取的,而是通过特定的实验过程——逆转录(reverse transcription)——从mRNA(信使核糖核酸)分子中衍生出来的。
一、定义与生成过程
定义: cDNA是mRNA的互补链所对应的DNA序列。由于它是由mRNA反转录而来,因此其碱基序列与原始mRNA(除了尿嘧啶U被胸腺嘧啶T替换外)是完全互补的。
生成过程:
- 首先,从细胞中提取出所需的mRNA。
- 然后,使用一种名为逆转录酶的特殊酶类,以mRNA为模板合成一条单链的cDNA。
- 接着,通过DNA聚合酶的作用,以这条单链cDNA为模板合成另一条互补链,从而形成一个双链的cDNA分子。
二、特性与应用
特性:
- cDNA只包含编码蛋白质的基因的外显子部分,而不包含内含子和非编码区,这使得它成为研究特定蛋白质编码基因的理想工具。
- 由于cDNA是通过逆转录得到的,因此它不包含任何启动子、终止子等调控元件,这些元件对于基因的表达和调控至关重要,但在研究特定基因的编码序列时通常可以忽略不计。
应用:
- 基因克隆:通过将cDNA插入到载体中并导入到宿主细胞中,可以实现目的基因的大量扩增和表达。
- 功能研究:利用cDNA可以构建表达载体来研究特定基因的功能和作用机制。
- 疾病诊断与治疗:通过分析患者样本中的cDNA序列变异可以辅助疾病的诊断和治疗方案的制定。
三、注意事项
尽管cDNA在研究基因功能和疾病机制方面具有重要的应用价值,但需要注意的是它并不能完全代表生物体内的真实情况。因为cDNA只是mRNA的反向转录产物,而mRNA本身可能受到多种因素的影响而发生变化(如转录后修饰、降解等)。因此,在进行相关研究时需要综合考虑这些因素对实验结果的影响。
